利用PCR产物一步法敲除大肠埃希菌的外排泵基因acrAB

江汉大学学报（自然科学版） ›› 2012, Vol. 40 ›› Issue (5): 76-79.

利用PCR产物一步法敲除大肠埃希菌的外排泵基因acrAB

纪芳，鄢志雄，李文丹，祝贺，梁勇

江汉大学医学院，湖北武汉430056

收稿日期:2012-04-17 出版日期:2012-10-20 发布日期:2013-11-07
通讯作者: 梁勇(1976—)，男，副教授，博士，研究方向:生态毒理学。E-mail:ly76@263.net
作者简介:纪芳(1977—)，女，讲师，博士，研究方向:微生物分子生物学。和生态毒理学。
基金资助:
武汉市科技局青年科技晨光计划项目(201271031394)；环境化学与生态毒理学国家重点实验室开放基金课题(KF2011-06)

Deletion of Efflux Pump Gene acrAB in E. coli withPCR Product One-step Method

JI Fang,YAN Zhi-xiong,LI Wen-dan,ZHU He,LIANG Yong

School of Medicine,Jianghan University,Wuhan 430056,Hubei,China

Received:2012-04-17 Online:2012-10-20 Published:2013-11-07

摘要/Abstract

摘要： 通过电转化将一段PCR产物引入宿主菌BW25113／pIJ790细胞内，PCR产物两端有与染色体同源的30个核苷酸序列，中间是抗生素抗性基因。pIJ790上编码λ噬菌体的3个重组蛋白Exo、Bet和Gam组成Red重组系统，可实现线性片段的一步法高效重组，以PCR产物中的抗生素抗性基因取代靶基因。通过该方法得到了大肠埃希菌的外排泵基因acrAB敲除突变株，该菌株在抗菌物质的抗菌机制研究方面能发挥一定的作用。

关键词: Red重组, PCR, 基因敲除, 外排泵基因

Abstract: A PCR fragment including 30nt of flanking DNA homologous to the chromosome in each end and a antibiotic－resistant gene in the middle is introduced into the host cell of BW25113／ pIJ790. The three proteins of λ phage－－－Exo、Bet and Gam, expressed by pIJ790, composing the Red recombination system has the advantage of high one－step recombination rate of linear fragment. The antibiotic－resistant gene replaces the target gene as a result. This research obtaines a derivative of E. coli whose efflux pump gene acrAB is deleted. The mutant strain will help to research of mechanism of antimicrobial materials.

Key words: Red recombination, PCR, gene knock－out, efflux pump gene

中图分类号:

Q789
R378.21

纪芳，鄢志雄，李文丹，祝贺，梁勇. 利用PCR产物一步法敲除大肠埃希菌的外排泵基因acrAB[J]. 江汉大学学报（自然科学版）, 2012, 40(5): 76-79.

JI Fang,YAN Zhi-xiong,LI Wen-dan,ZHU He,LIANG Yong. Deletion of Efflux Pump Gene acrAB in E. coli withPCR Product One-step Method[J]. Journal of Jianghan University(Natural Science Edition), 2012, 40(5): 76-79.

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