江汉大学学报(自然科学版) ›› 2010, Vol. 38 ›› Issue (3): 95-97,101.

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小鼠H-2Db-BSP融合基因的构建与表达

李佳楠,董元火   

  1. 江汉大学,生命科学学院生物技术系,湖北,武汉,430056
  • 收稿日期:2014-01-02 修回日期:2014-01-02 出版日期:2010-05-12 发布日期:2014-01-02

  • Received:2014-01-02 Revised:2014-01-02 Online:2010-05-12 Published:2014-01-02

摘要: 目的:构建小鼠H-2D~b-BSP融合基因,并诱导其在大肠杆菌中表达.方法:采用RT-PCR方法从C57BL/6小鼠淋巴细胞中扩增出H-2D~bα链的胞外段基因,经双酶切置换已构建的HLA-A*0201-BSP重组体中的HLA-A*0201胞外段序列,使H-2Db与BirA酶底物肽(BSP)序列融合,构建H-2D~b-BSP融合基因表达载体,转化大肠杆菌BL21(λDE3)菌株,筛选重组子,并经IPTG诱导融合蛋白表达.结果:构建的H-2D~b-BSP融合基因插入正确且序列与GenBank一致;经1 mmol/L浓度的IPTG诱导后4b蛋白表达达到高峰,且融合蛋白以包涵体形式存在.结论:成功构建H-2~b-BSP融合基因,并诱导其在大肠杆菌得以表达,为进一步构建H-2D~b四聚体,研究T细胞应答提供了物质基础.