摘要: 目的:构建重组人神经生长因子(rhβ-NGF)杆状病毒表达载体,转染昆虫细胞从而获得目的蛋白的大量表达.方法:从人胎盘组织中提取细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增β-NGF基因片段,经BamHI、HindⅢ双酶切后插入杆状病毒表达载体pFastBacTMDual的多克隆位点处,构建出重组载体pFastBacTM-Dual+[rhβ-NGF].对构建的载体进行PCR和酶切鉴定并测序.采用脂质体转染方法将表达载体转入昆虫细胞系Sf9中,通过双抗夹心ELISA对rbβ-NGF的表达进行检测.结果:构建的rhβ-NGF基因插入正确且序列与GenBank一致.ELIsA检测结果显示病毒感染的Sf9细胞可表达rhβ-NGF.结论:成功构建出杆状病毒表达载体pFastBacTMDual+[rhβ-NGF],并在昆虫细胞系Sf9中得到表达,为大量制备重组人神经生长因子奠定了基础.