食源有害微生物DNA 快速提取与多重PCR 检测初探

doi:10.16389/j.cnki.cn42-1737/n.2020.04.007

江汉大学学报（自然科学版） ›› 2020, Vol. 48 ›› Issue (4): 46-53.doi: 10.16389/j.cnki.cn42-1737/n.2020.04.007

食源有害微生物DNA 快速提取与多重PCR 检测初探

张静，黄钢，孙婧，张英洁，付宇浩，李朝阳，菅一鸣，李振庭

江汉大学生命科学学院，湖北武汉 430056

发布日期:2020-08-06
作者简介:张静（1974— ），女，高级实验师，研究方向：生物化学与分子生物学。

Preliminary Study on Rapid Extraction of DNA and Multiplex PCR Detection of Harmful Food-Borne Microorganisms

ZHANG Jing，HUANG Gang，SUN Jing，ZHANG Yingjie，FU Yuhao，LI Chaoyang，JIAN Yiming，LI Zhenting

School of Life Sciences，Jianghan University，Wuhan 430056，Hubei，China

Published:2020-08-06

摘要/Abstract

摘要： 目的 建立一种食源有害微生物快速检测体系。方法 以致泻大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌5 种有害菌为检测对象，以30 s 快速提取基因组DNA 及多重PCR 的试验技术进行了研究。结果 筛选出特异性引物8 对；发现致泻大肠埃希氏菌与单核细胞增生李斯特氏菌能够进行DNA 快速提取PCR 检测；构建了致泻大肠埃希氏菌与单核细胞增生李斯特氏菌DNA 快速提取多重PCR 检测体系，筛选出多重PCR 成功的引物组合4 对：rfbE/Hly、fbE/HlyA1、rfbE/HlyA2 和eaeA/HlyA2，并对试验体系进行了优化。结论 利用DNA 快速提取多重PCR 检测某些食源有害微生物是可行的。但是，针对具体情况采取措施优化反应十分必要，针对多重PCR 设计相应引物，可能是优化关键。

关键词: 食源有害微生物, DNA 快速提取, 多重PCR, 检测

Abstract: Objective To establish a rapid detection system for harmful food-borne microorganisms. Methods In this study，5 kinds of harmful bacteria such as Escherichia coli，Staphylococcus aureus，Shigella，Salmonella，and Listeria monocytogenes were detected. The rapid extraction of genomic DNA in 30 seconds and multiplex PCR were used as experimental techniques. Results 8 pairs of specific primers of the 5 bacteria were screened out，and it was found that Escherichia coli and Listeria monocytogenes could be detected by DNA rapid extraction and PCR. A multiplex PCR system based on DNA rapid extraction of Escherichia coli and Listeria monocytogenes was established. Four pairs of primer combinations：rfbE/Hly，fbE/HlyA1，rfbE/HlyA2，and eaeA/HlyA2，were screened out successfully in multiplex PCR experiments，and the experiments were optimized. Conclusion It is feasible to detect harmful food-borne microorganisms by DNA rapid extraction and multiplex PCR. However，it is necessary to take measures to optimize the experiments. The design of primers for multiplex PCR may be the key to optimize the experiments.

Key words: harmful food-borne microorganisms, rapid extraction of DNA, multiplex PCR, detection

中图分类号:

TS201.3

张静，黄钢，孙婧，张英洁，付宇浩，李朝阳，菅一鸣，李振庭. 食源有害微生物DNA 快速提取与多重PCR 检测初探[J]. 江汉大学学报（自然科学版）, 2020, 48(4): 46-53.

ZHANG Jing，HUANG Gang，SUN Jing，ZHANG Yingjie，FU Yuhao，LI Chaoyang，JIAN Yiming，LI Zhenting. Preliminary Study on Rapid Extraction of DNA and Multiplex PCR Detection of Harmful Food-Borne Microorganisms[J]. Journal of Jianghan University (Natural Science Edition), 2020, 48(4): 46-53.

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